PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

Cats are susceptible to feline panleukopenia virus (FPV) and canine parvovirus type 2 (CPV-2). Therefore, coinfection and superinfection with multiple parvovirus strains may occur, resulting in high heterogeneity and recombination. Considering the importance of cats as a potential source of genetic diversity for parvoviruses, we investigated the frequency of parvovirus infection in cats using their blood and fecal samples and performed molecular characterization of parvovirus strains circulating in cat populations. Accordingly, the fecal and blood samples of 60 cats with gastroenteritis symptoms were collected from Turkey’s Burdur, Isparta, and Izmit provinces. Of these 15 fecal samples tested as parvovirus-positive by PCR, 14 were confirmed to have been infected with true FPV strains by sequencing analysis. Through the phylogeny analysis, those were located in the FPV cluster, closely related to CPV-2, and one was discriminated in the CPV-2b cluster. Additionally, sequence analysis of the VP2 gene of CPV and FPV revealed that the FPV strains detected in Turkey and the vaccine strains were highly related to each other, with a nucleotide identity of 97.7- 100%. Furthermore, 13 variable positions were detected in VP2 of the field and reference FPV strains. Three synonymous mutations were determined in the VP2 gene. Some amino acid mutations in the VP2 protein-affected sites were considered responsible for the virus’s biological and antigenic properties. The partial sequence analysis of the VP2 gene revealed that four FPV strains detected in Turkey have a single nucleotide change from T to G at the amino acid position 384 between the nucleotides 3939-3941, which was reported for the first time. Therefore, these four isolates formed a different branch in the phylogenetic tree. The results suggest that both FPV and CPV-2b strains are circulating in domestic cats in Turkey and cats should be considered as potential sources of new parvovirus variants for cats, dogs and other animals.

• FPV CPV molecular characterization carnivore protoparvovirus cats Turkey.

Abstract in Portuguese:

Os gatos são suscetíveis ao vírus da panleucopenia felina (FPV) e ao parvovírus canino tipo 2 (CPV-2). Portanto, coinfecção e superinfecção com múltiplas cepas de parvovírus podem ocorrer, resultando em alta heterogeneidade e recombinação. Considerando a importância dos gatos como uma fonte potencial de diversidade genética para parvovírus, investigamos a frequência da infecção por parvovírus em gatos usando suas amostras de sangue e fezes e realizamos a caracterização molecular de cepas de parvovírus circulantes nas populações de gatos. Amostras fecais e de sangue de 60 gatos com sinais de gastroenterite foram coletadas nas províncias de Burdur, Isparta e Izmit, na Turquia. Destas, 15 amostras fecais testaram positivas para parvovírus por PCR e 14 foram confirmadas como infectadas com cepas verdadeiras de FPV por análise de sequenciamento. Através da análise filogenética, aqueles foram localizados no agrupamento FPV que está intimamente relacionado com o CPV-2, e um foi discriminado no agrupamento CPV-2b. Além disso, a análise da sequência do gene VP2 de CPV e FPV revelou que as cepas de FPV detectadas na Turquia e as cepas vacinais eram altamente relacionadas entre si, com uma identidade de nucleotídeos de 97,7-100%. Além disso, 13 posições variáveis foram detectadas em VP2 das cepas de campo e FPV de referência. Três mutações sinônimas foram determinadas no gene VP2. Algumas mutações de aminoácidos nos locais afetados pela proteína VP2 foram consideradas responsáveis pelas propriedades biológicas e antigênicas do vírus. A análise da sequência parcial do gene VP2 revelou que quatro cepas de FPV detectadas na Turquia têm uma única mudança de nucleotídeo de T para G na posição do aminoácido 384 entre os nucleotídeos 3939-3941, o que foi relatado pela primeira vez. Portanto, esses quatro isolados formaram um ramo diferente na árvore filogenética. Os resultados sugerem que ambas as cepas FPV e CPV-2b estão circulando em gatos domésticos na Turquia e os gatos devem ser considerados como fontes potenciais de novas variantes de parvovírus para gatos, cães e outros animais.

• Vírus da panleucopenia felina parvovírus canino caracterização molecular gatos felinos Turquia

Abstract in English:

Giardiasis is an important and prevalent zoonosis in dogs and humans caused by Giardia spp. The close relationship between pets and humans has physical, emotional and social benefits. The dogs have an important role in Giardia duodenalis cycle and transmission. This study aimed to verify the occurrence of the parasite in dogs from Central Region, in Santa Maria, Rio Grande do Sul State, Brazil, from April to October 2018. Dog feces (230) were submitted to Faust coproparasitological and molecular analyses. The positive samples in the nested-PCR (β-giardin gene) were sent for DNA sequencing and phylogenetic analyses (Neighbor-Joining). The occurrence of G. duodenalis, was 5.6% (13/230) and 4.3% (10/230) detected by coproparasitological technique and nested-PCR, respectively. There was no difference in the sensitivity of the tests used. From the faecal samples analyzed, there were no differences among the variables: diagnostic techniques, local, sex, and age of the animals (p>0.05). Only in the stool examination methodology a difference was observed between the ages (p<0.05). G. duodenalis assemblages were C and D, frequently reported in dogs. The close relationship between dogs and people may allow co-infections of circulating parasites in the population, including Giardia spp. and increasing the risk of transmission of zoonotic agents.

• Molecular characterization Giardia duodenalis infection dogs Brazil protozoa giardiasis nested-PCR phylogeny

Abstract in Portuguese:

A giardíase é uma zoonose importante e prevalente em cães e humanos, sendo causada por Giardia spp. A estreita relação entre animais de estimação e seres humanos traz benefícios físicos, emocionais e sociais. Os cães têm um papel importante no ciclo e transmissão de Giardia duodenalis. Este estudo teve como objetivo verificar a ocorrência do parasita em cães da Região Central, em Santa Maria, RS, Brasil, de abril a outubro de 2018. As fezes de cães (230) foram submetidas a técnica coproparasitológica de Faust e análises moleculares. As amostras positivas no nested-PCR (gene β-giardin) foram enviadas para sequenciamento de DNA e posterior análise filogenética (Neighbor-Joining). A ocorrência de G. duodenalis foi de 5,6% (13/230) e 4,3% (10/230) detectados pela técnica coproparasitológica e nested-PCR, respectivamente. Não houve diferença na sensibilidade dos testes utilizados. Das amostras fecais analisadas, não houve diferenças entre as variáveis: técnicas de diagnóstico, local, sexo e idade dos animais (p>0,05). Somente na metodologia de exame de fezes observou-se diferença entre as idades (p<0,05). As assemblages de G. duodenalis encontradas foram C e D, frequentemente relatadas em cães. A estreita relação entre cães e pessoas pode permitir co-infecções de parasitas circulantes na população, incluindo Giardia spp. e aumentando o risco de transmissão de agentes zoonóticos.

• Caracterização molecular Giardia duodenalis cães infecção Brasil protozoário giardíase nested-PCR filogenia caninos

Abstract in English:

Goose parvovirus (GPV), also called Derzsy’s disease, is a viral pathogen that causes high morbidity and mortality in goslings and ducklings. In this study, we perform the molecular characterization of the GPV in Turkey. The definition of similarity to the world of GPV isolates in Turkey and construction of a phylogenetic tree was aimed. For this purpose, the presence of GPV in the liver, spleen, and intestine tissues of nine goslings with symptoms such as dysphagia, bilateral ocular swelling, eye discharge, diarrhea, and fatigue were investigated by real-time PCR method and all samples were detected as positive. According to the data obtained by molecular characterization, phylogenetic analysis of GPV has been presented in Turkey. As a result of this study, it was determined that the GPVs available in Turkey are virulent strains.

• Goose parvovirus real-time pcr phylogenetic analysis Turkey geese

Abstract in Portuguese:

O parvovírus do ganso (GPV), também chamado de doença de Derzsy, é um patógeno viral que causa alta morbidade e mortalidade em gansos e patinhos. Neste estudo, objetivou-se a determinação da caracterização molecular do GPV na Turquia, a definição da similaridade com o mundo dos isolados de GPV na Turquia e a construção de uma árvore filogenética. Para tanto, a presença de GPV no fígado, baço e tecidos do intestino de nove gansos com sintomas como disfagia, edema ocular bilateral, secreção ocular, diarreia e fadiga foram investigados pelo método de PCR em tempo real e todas as amostras foram detectadas tão positivo. À luz dos dados obtidos por caracterização molecular, a análise filogenética do GPV foi apresentada na Turquia. Como resultado deste estudo, foi determinado que os GPVs disponíveis na Turquia são cepas virulentas.

• Parvovírus de ganso PCR em tempo real análise filogenética Turquia gansos

Abstract in English:

Campylobacter spp. is a bacterial agent that causes gastroenteritis in humans and may trigger Guillain-Barré Syndrome (GBS) and is also considered one of the main foodborne diseases in developed countries. Poultry and pigs are considered reservoirs of these microorganisms, as well as raw or undercooked by-products are often incriminated as a source of human infection. Treatment in human cases is with macrolide, such erythromycin, that inhibits the protein synthesis of the microorganism. This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from intestinal content samples of broiler chickens (n=20) and swine (n=30) to characterize the erythromycin resistance profile of the strains and to detect molecular mechanisms involved in this resistance. The minimum inhibitory concentration was determined by agar dilution. The Mismatch Amplification Mutation Assay-Polymerase Chain Reaction (MAMA-PCR) was performed to detect mutations at positions 2074 and 2075 of 23S rRNA region, in addition to PCR test to detect the erm(B) gene. From the intestinal content of broiler chickens, 18 strains of C. jejuni and two strains of C. coli were isolated, whereas, from swine samples, no C. jejuni strain and 14 strains of C. coli were isolated. All C. coli strains were resistant, and three C. jejuni strains from broilers chickens were characterized with intermediate resistance to erythromycin. The MIC of the strains ranged from ≤0.5mg/µL to ≥128mg/µL. All resistant strains had the A2075G mutation, and one strain with intermediate resistance had the A2075G mutation. However, the A2074C mutation and the erm(B) gene were not detected. High resistance levels were detected in C. coli strains isolated from swine. The MAMA-PCR is a practical tool for detecting the erythromycin resistance in Campylobacter strains.

• Phenotype molecular characterization erthromycin resistance Campylobacter jejuni Campylobacter coli strains swine broiler chickens foodborne pathogens MAMA-PCR macrolides A2075G

Abstract in Portuguese:

Campylobacter spp. é um agente bacteriano causador de gastroenterite em humanos e associado à síndrome de Guillain–Barré, sendo a campilobacteriose considerada uma das principais enfermidades de origem alimentar. Aves e suínos são importantes reservatórios desses microrganismos e seus produtos derivados crus ou mal cozidos são muitas vezes incriminados como fonte de infecção humana. A primeira escolha para o tratamento em casos humanos são os antimicrobianos da classe dos macrolídeos como à eritromicina. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi isolar Campylobacter jejuni e C. coli a partir de 20 amostras de conteúdo intestinal de frangos de corte e de 30 de suínos ao abate e investigar a resistência à eritromicina das estirpes obtidas e os possíveis mecanismos moleculares envolvidos nesta resistência. A concentração inibitória mínima foi determinada pela diluição em ágar e a técnica MAMA-PCR foi utilizada para detecção de mutações nas posições 2074 e 2075 da região 23s rRNA, foi pesquisado também a presença do gene erm(B) pela PCR. A partir do conteúdo intestinal de frangos de corte foram isoladas 18 estirpes de C. jejuni e duas de C. coli, enquanto de suínos foram obtidas 14 estirpes de C. coli e nenhuma estirpe de C. jejuni. Todas as estirpes de C. coli de suínos foram identificadas como resistentes e três estirpes de C. jejuni de frangos foram caracterizadas com resistência intermediária. A CIM das estirpes variou de ≤0,5mg/µL a ≥128mg/µL. Todas as estirpes resistentes tinham a mutação A2075G e uma cepa com resistência intermediária também apresentou a mutação A2075G. Não foi detectada a mutação A2074C ou a presença do gene erm(B) em nenhuma das estirpes obtidas. Os resultados revelam um alto nível de resistência em estirpes de C. coli isoladas de suínos frente a eritromicina. A técnica MAMA PCR utilizada se constitui em uma ferramenta prática para detecção da resistência à eritromicina em estirpes de C. jejuni e C. coli.

• Caracterização fenotípica caracterização molecular resistência à eritromicina cepas Campylobacter jejuni Campylobacter coli suínos frangos de corte patógenos de origem alimentar macrolídeos MAMA-PCR A2075G

Abstract in English:

Arcobacter is an emerging zoonotic pathogen, and the major transmission routes to humans are the handling or consumption of contaminated raw/undercooked food products of animal origin, water and seafood. The isolation and identification of Arcobacter species are not routine in clinical laboratories; therefore, its true incidence in human infections may be underestimated. The present study aimed to isolate and characterize Arcobacter from carcasses and fecal samples collected at swine slaughterhouses and from meat markets in São Paulo State, Brazil. The isolates were identified using multiplex-PCR to differentiate the species and analyzed by single-enzyme amplified fragment length polymorphism (SE-AFLP). Arcobacter spp. were isolated from 73.0% of swine carcasses, 4% of fecal samples and 10% of pork samples. A. butzleri was the most prevalent species identified, followed by A. cryaerophilus. Interestingly, the carcasses presented higher frequency of A. butzleri isolation, whereas only A. cryaerophilus was isolated from fecal samples. SE-AFLP enabled the characterization of A. butzleri and A. cryaerophilus into 51 and 63 profiles, respectively. The great genetic heterogeneity observed for both species corroborates previous reports. This study confirms the necessity for a standard isolation protocol and the improvement of molecular tools to further elucidate Arcobacter epidemiology.

• Arcobacter butzleri Arcobacter cryaerophilus swine slaughterhouse AFLP bacterioses

Abstract in Portuguese:

Arcobacter é um patógeno zoonótico emergente e as principais formas de transmissão para humanos são a manipulação e o consumo de água ou alimentos contaminados crus ou mal cozidos. O isolamento e a identificação das espécies de Arcobacter não fazem parte da rotina dos laboratórios clínicos; dessa forma, a real incidência da infecção em humanos é subestimada. O presente estudo teve o objetivo de isolar e caracterizar Arcobacter de carcaças e amostras de fezes coletadas em dois abatedouros de suínos e de carne suína de dois açougues no Estado de São Paulo, Brasil. As estirpes foram identificadas utilizando multiplex-PCR para diferenciar as espécies e foram analisadas por polimorfismo no comprimento de fragmentos amplificados (SE-AFLP). Arcobacter spp. foi isolado de 73% das carcaças, 4% das amostras de fezes e de 10% das amostras de carne suína avaliadas. A. butzleri foi a espécie mais prevalente, seguida por A. cryaerophilus. As carcaças apresentaram a maior taxa de isolamento de A. butzleri enquanto que apenas A. cryaerophilus foi isolado das amostras de fezes. SE-AFLP possibilitou a caracterização de A. butzleri e A. cryaerophilus em 51 e 63 perfis de bandas, respectivamente. A grande heterogeneidade genética observada para ambas as espécies corrobora estudos previous. Estes resultados confirmam a necessidade de protocolos de isolamento padronizados e o aperfeiçoamento das ferramentas moleculares para aprofundar os conhecimetos sobre epidemiologia das infecções pelo gênero Arcobacter.

• Arcobacter butzleri Arcobacter cryaerophilus suíno abatedouro AFLP carne suína bacterioses

Abstract in English:

The sarcocystosis is a worldwide spread disease and can affect birds, reptiles and many mammals, including man. The aim of this study was to detect the presence of Sarcocystis spp. and characterize the species found in 375 samples of meat products (filet mignon, ground beef and colonial salami). For this, we carried out the detection of the parasite by PCR for the amplification of the partial 18S rRNA gene and molecular characterization using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) with restriction enzymes Bcl I, Alu I and Rsa I. The occurrence of Sarcocystis spp. was 17% (64/375) of all samples. Among the meat products evaluated, the filet mignon samples were positive in 5.6% (7/125), the ground beef in 12.8% (16/125) and the colonial salami in 32.8% (41/125). Of the positive samples, Sarcocystis hirsuta and Sarcocystis hominis were detected, with prevalence of 93.7% (60/64) and 6.3% (4/64), respectively. Considering the relevance of sarcocystosis in public health, the occurrence of S. hominis found may be a risk factor to human contamination. However, the presence of DNA of this parasite does not necessarily mean potential of infection to humans, because good practices in the manufacturing processes can reduce the viability of the cysts.

• Sarcocystis spp. meat 18S rRNA food security meat products restriction enzyme sarcocystosis parasitoses

Abstract in Portuguese:

A sarcocistose é uma doença distribuída mundialmente, podendo acometer aves, répteis e diversos mamíferos, incluindo o homem. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença de Sarcocystis spp. e caracterizar as espécies encontradas em 375 amostras de produtos cárneos (filé mignon bovino, carne moída bovina e salame colonial). Para isso, foi realizada a detecção do parasita através da técnica de PCR para amplificação parcial do gene 18S rRNA e sua caracterização molecular utilizando o polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (RFLP) com as enzimas de restrição Bcl I, Rsa I e Alu I. A ocorrência de Sarcocystis spp. foi de 17% (64/375) do total de amostras testadas pelo PCR. Entre os produtos cárneos avaliados, 5,6% (7/125) das amostras de filé mignon, 12,8% (16/125) de carne moída e 32,8% (41/125) de embutido colonial, foram positivas para presença do DNA do Sarcocystis spp. Entre estas amostras positivas, as espécies caracterizadas foram Sarcocystis hirsuta e Sarcocystis hominis com prevalências de 93,7% (60/64) e 6,3% (4/64), respectivamente. Considerando à relevância da sarcocistose na área da saúde pública, a ocorrência de S. hominis encontrado neste estudo, pode ser um fator de risco para a contaminação humana. Porém, a presença do DNA deste protozoário não significa necessariamente potencial de infecção aos humanos, pois cuidados nos processos de fabricação podem reduzir a viabilidade dos cistos.

• Sarcocystis spp. carne 18S rRNA segurança alimentar produtos cárneos restrição enzimática sarcocistose parasitoses

Abstract in English:

ABSTRACT.- Palma J.M., Lisboa R.C., Rodrigues D.P., Santos A.F.M., Hofer E. & Santana A.P. 2016. [Molecular characterization of Listeria monocytogenes from beef samples and cattle slaughterhouses located in the Federal District, Brazil.] Caracterização molecular de Listeria monocytogenes oriundas de cortes cárneos bovinos e de abatedouros frigoríficos de bovinos localizados no Distrito Federal, Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(10):957-964. Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF 70910-900, Brazil. E-mail: joanamarchesini@gmail.com The aim of the study was the analysis of Listeria monocytogenes strains in beef samples as well as slaughterhouse environment, located in the Federal District, promote serotyping by polymerase chain reaction (PCR), perform antibiotic susceptibility and submit the strains to Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). A total of 125 beef samples were analyzed, 45 samples of carcasses swabs and 43 swab samples. It detected 13 strains of Listeria monocytogenes, 11 in beef samples. and 2 in slaughterhouse environment. No carcass swabs strains were isolated. Among the 13 strains of L. monocytogenes six strains of serotype 4b were found, five serotype 1/2c and two strains of serotype 1/2a. Among the 11 strains of L. monocytogenes found in beef, one (9.1%) strain showed resistance to erythromycin, one (9.1%) strain to gentamicin, one to ciprofloxacin (9.1%) and all strains (100%) were resistant to nalidixic acid. The two strains coming from the slaughterhouse drains, all (100%) were resistant to nalidixic acid and Sulfonamides. The analysis by pulsed field gel electrophoresis (PFGE) showed 13 different pulsotypes; they were grouped into three different clonal groups, coincidentally correlated with the three different serotypes found, what suggests a widespread dissemination of these profiles in the Federal District, Brazil.

• Listeria monocytogenes listeriosis meat eletroforese listeriose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Palma J.M., Lisboa R.C., Rodrigues D.P., Santos A.F.M., Hofer E. & Santana A.P. 2016. [Molecular characterization of Listeria monocytogenes from beef samples and cattle slaughterhouses located in the Federal District, Brazil.] Caracterização molecular de Listeria monocytogenes oriundas de cortes cárneos bovinos e de abatedouros frigoríficos de bovinos localizados no Distrito Federal, Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(10):957-964. Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Brasília, Brasília, DF 70910-900, Brazil. E-mail: joanamarchesini@gmail.com Este trabalho teve como objetivo realizar a detecção de cepas de Listeria monocytogenes de cortes cárneos bovinos bem como no ambiente de abatedouros frigoríficos localizados no Distrito Federal, promover a sorotipificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR), realizar antibiograma e submeter às cepas à eletroforese de campo pulsado (Pulsed-field gel electrophoresis - PFGE). Foram analisados um total de 125 cortes cárneos bovinos, 45 amostras de swabs de carcaças e 43 amostras de swabs em que foram detectados 13 cepas de Listeria monocytogenes, sendo 11 em cortes cárneos bovinos e 2 swabs de ambiente em um abatedouro frigorifico. Não foram isoladas cepas de swabs de carcaça. Dentre as 13 cepas de Listeria monocytogenes foram encontradas seis cepas do sorotipo 4b, cinco do sorotipo 1/2c e duas cepas do sorotipo 1/2a. Dentre as 11 cepas de L. monocytogenes encontradas em cortes cárneos bovino, uma (9,1%) cepa apresentou resistência a eritromicina, outra (9,1%) cepa a gentamicina e outra a ciprofloxacina (9,1%) e todas as cepas (100%) apresentaram resistência ao Ác. Nalidíxico. Das duas (2) cepas oriundas de ralos de abatedouro frigorífico, todas (100%) apresentaram resistência ao Ác. Nalidíxico e a sulfonamidas. A análise por eletroforese de campo pulsante (PFGE) demonstrou 13 diferentes pulsotipos, em que foram agrupados em 3 diferentes grupos clonais, que coincidentemente se correlacionavam com os 3 diferentes sorotipos encontrados sugerindo uma ampla disseminação desses perfis no Distrito Federal.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Beserra L.A.R., Bernardes N.T.C.G., Brandão P.E. & Gregori F. 2015. Monitoring and molecular characterization of group D rotavirus in Brazilian poultry farms. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):536-540. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Avenida Professor Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: laila_andreia@hotmail.com Rotaviruses are etiological agents of diarrhea both in humans and in several animal species. Data on avian Group D rotaviruses (RVD) are scarce, especially in Brazil. We detected RVD in 4 pools of intestinal contents of broilers, layer and broiler breeders out of a total of 111 pools from 8 Brazilian states, representing an occurrence of 3.6%, by a specific RVD RT-PCR targeting the VP6 gene. Phylogenetic tree confirmed that the Brazilian strains belong to group D and 3 of the sequences were identical in terms of amino acid whereas one showed 99.5% identity with the others. The sequences described in this study are similar to other sequences previously detected in Brazil, confirming the conserved nature of the VP6 protein.

• Rotavirus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Beserra L.A.R., Bernardes N.T.C.G., Brandão P.E. & Gregori F. 2015. Monitoring and molecular characterization of group D rotavirus in Brazilian poultry farms. [Monitoramento e caracterização molecular de rotavírus do grupo D em criações comerciais brasileiras.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(6):536-540. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Avenida Professor Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: laila_andreia@hotmail.com Rotavírus são agentes etiológicos de diarreia tanto em humanos como em várias espécies animais. Dados sobre rotavírus do grupo D (RVD) em aves são escassos, especialmente no Brasil. Nós detectamos RVD em 4 pools de conteúdo intestinal de frango de corte, poedeiras e matrizes de um total de 111 pools originários de 8 estados brasileiros, representando uma ocorrência de 3,6% a partir de uma RT-PCR específica para RVD, tendo como alvo o gene VP6. A árvore filogenética confirmou que as amostras brasileiras pertencem ao grupo D e três das sequências obtidas foram idênticas em termos de aminoácidos enquanto uma apresentou 99,5% de identidade com as demais. As sequências aqui definidas são semelhantes a outras sequências previamente definidas no Brasil, confirmando a natureza conservada da proteína VP6.

Abstract in English:

ABSTRACT.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Headley S.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M. & Alfieri A.F. 2015. Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):431-436. Laboratory of Animal Virology, Department of Veterinary Preventive Medicine, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Sarcoids are fibroblastic lesions, which are considered as the most common skin tumors of horses; spontaneous regression rarely occurs. The bovine papillomavirus (BPV) types 1 and 2 may be involved in the pathogenesis of sarcoids, and probably the recently described BPV type (BPV13) might be associated with the pathogenesis of this lesion. This study characterized the DNA of BPVs in sarcoids from 15 horses from Brazil by analyzing 20 cutaneous lesions (12 recently collected; 8 from formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissues). Histopathology confirmed the proliferative lesions as sarcoids. Three PCRs were performed to amplify papillomavirus (PV) DNA. For screening, the primers IFNR2/IDNT2 were used to amplify a fragment of the PV L1 ORF. The second primer set was complementary to a common sequence of the E5L2 genomic region of BPV1, 2, and 13. The third primer pair (FAP59/FAP64) targeted a fragment of the PVs L1 ORF. The screening and E5L2 PCRs yielded amplicons in all samples evaluated. The FAP amplicons identified BPV1, 2, and 13 only from fresh tissue samples. The phylogenetic analyses of E5L2 resulted in the identification of BPV1, 2, and 13 in 14 (70%), 2 (10%), and 4 (20%) sarcoids, respectively. Two horses demonstrated multiple lesions: the sarcoids of one of these contained only BPV1 DNA and those of the other contained three types of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13). This study confirmed the presence of BPV1, 2, and 13 DNA in equine sarcoids. Moreover, these findings represent the first description of three types of BPV diagnosed in the same horse, as well as the first confirmation of BPV1 and 2 in horses from Brazil.

• Papillomavirus Bovine Deltapapillomavirus skin tumor Papilomavírus Deltapapillomavirus bovino tumor de pele

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- De Alcântara B.K., Alfieri A.A., Headley S.A., Rodrigues W.B., Otonel R.A.A., Lunardi M. & Alfieri A.F. 2015. Molecular characterization of bovine Deltapapillomavirus (BPV1, 2, and 13) DNA in equine sarcoids. [Caracterização molecular de DNA de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em sarcoides equinos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(5):431-436. Laboratory of Animal Virology, Department of Veterinary Preventive Medicine, Universidade Estadual de Londrina, Rodovia Celso Garcia Cid, Campus Universitário, Cx. Postal 10011, Londrina, PR 86057-970, Brazil. E-mail: alfieri@uel.br Sarcoides são tumores fibroblásticos, considerados os tumores de pele mais comuns em pele de equinos e que raramente apresentam regressão espontânea. Papilomavírus bovino (BPV) tipos 1 e 2 são relacionados com a patogenia do sarcoide e, provavelmente, o BPV tipo 13 (BPV13), recentemente descrito, também pode estar associado com a formação dessa lesão. Neste estudo, 20 amostras de lesões cutâneas, sendo 12 constituídas por tecidos frescos e 8 amostras de tecido fixado em formalina e embebido em parafina, provenientes de 15 cavalos foram utilizadas para a identificação do DNA de BPV. A análise histopatológica (HE) confirmou todas as lesões como sarcoide. Para a amplificação do DNA de papilomavírus (PV) foram realizadas três reações de PCR. Como triagem, os primers IFNR2/IDNT2 foram utilizados para amplificar um fragmento da ORF L1 do PV. O segundo par de primers utilizado é complementar a sequência dos genes E5 e L2 de BPVs 1, 2 e 13. O terceiro par de primers (FAP59/FAP64) utilizado tem o gene L1 como alvo. A primeira e a segunda PCRs permitiram amplificar produtos em todas as amostras avaliadas. Entretanto, na terceira reação, na qual foram utilizados os primers FAP, foi possível amplificar produtos com tamanho molecular esperado somente nas amostras constituídas por tecidos frescos. O sequenciamento de nucleotídeos e as análises filogenéticas realizadas nos fragmentos E5L2 resultaram na identificação de BPV1, 2 e 13 em 14 (70%), 2 (10%) e em 4 (20%) amostras de sarcoides, respectivamente. As amostras de sarcoides de um dos animais continha somente o DNA de BPV1. Entretanto, nas amostras provenientes do segundo cavalo foi possível identificar o DNA de três tipos de Deltapapillomavirus bovino (BPV1, 2 e 13) em lesões distintas. Este estudo ratifica a presença do DNA de BPV1, 2 e 13 em lesões de sarcoides em equinos, além de identificar três tipos de BPVs em um mesmo animal e descrever pela primeira vez no Brasil a presença de BPV1 e 2 nesse tipo de lesão.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Freitas Filho E.G., Ferreira M.R.A., Pinto J.F.N., Conceição F.R. & Moreira C.N. 2014. Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 from healthy dairy cattle in Mid-West Brazil: occurrence and molecular characterization. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):24-28. Departamento de Medicina Veterinária, Centro de Ciências Agrárias e Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Rodovia BR-364 Km 192 n° 3.800, Pq. Industrial, Jataí, GO 75801-615, Brazil. E-mail: cissanm@yahoo.com.br Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) serotype O157:H7 represents the major Shiga toxin-producing E. coli (STEC) strain related to large outbreaks and severe diseases such as hemorrhagic colitis (HC) and the potentially lethal hemolytic uremic syndrome (HUS). The aim of this study was to report the occurrence and molecular characterization of O157:H7 isolates obtained by rectal swab from 52 healthy dairy cattle belonging to 21 farms in Mid-West of Brazil. Detection of 16SrRNA, stx1, stx2, rfbO157, fliCh7, eae, ehxA, saa, cnf1, chuA, yjaA and TSPE4.C2 genes was performed by PCR. The isolates were further characterized by serotyping. Two hundred and sixty E. coli isolates were obtained, of which 126 were characterized as STEC. Two isolates from the same cow were identified as serotype O157:H7. Both isolates presented the stx2, eae, ehxA, saa and cnf1 virulence factor genes and the chuA gene in the phylogenetic classification (virulent group D), suggesting that they were clones. The prevalence of O157:H7 was found to be 1.92% (1/52 animals), demonstrating that healthy dairy cattle from farms in the Mid-West of Brazil are an important reservoir for highly pathogenic E. coli O157:H7.

• Shiga toxin Escherichia coli colitis hemolytic uremic syndrome toxina Shiga colite hemorrágica síndrome hemolítica urêmica

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Freitas Filho E.G., Ferreira M.R.A., Pinto J.F.N., Conceição F.R. & Moreira C.N. 2014. Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 from healthy dairy cattle in Mid-West Brazil: occurrence and molecular characterization. [Escherichia coli enterohemorrágica O157: H7 em bovinos leiteiros saudáveis no Centro-Oeste do Brasil: ocorrência e caracterização molecular.] Pesquisa Veterinária Brasileira 34(1):24-28. Departamento de Medicina Veterinária, Centro de Ciências Agrárias e Biológicas, Universidade Federal de Goiás, Rodovia BR-364 Km 192 n° 3.800, Pq. Industrial, Jataí, GO 75801-615, Brazil. E-mail: cissanm@yahoo.com.br Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) sorotipo O157:H7 representa as principais cepas de E. coli produtoras de toxina Shiga (STEC) relatadas em grandes surtos e doenças graves, tais como colite hemorrágica (CH) e síndrome hemolítica urêmica (SHU), potencialmente letais. O objetivo deste estudo foi reportar a ocorrência e caracterização molecular de STEC 0157:H7 isoladas por swab retal de 52 bovinos saudáveis pertencentes a 21 rebanhos leiteiros do Centro-Oeste do Brasil. A detecção dos genes 16SrRNA, stx1, stx2, rfbO157, fliCh7, eae, ehxA, saa, cnf1, chuA, yjaA e TSPE4.C2 foi realizada por PCR. Os isolados foram ainda caracterizados por sorotipagem. Dos 260 isolados de E. coli obtidos, 126 foram caracterizados como STEC. Dois deles, oriundos do mesmo animal, foram caracterizados como pertencentes ao sorotipo O157:H7. Ambos apresentaram os genes de virulência stx2, eae, ehxA, saa e cnf1 e na caracterização filogenética, o gene chuA (grupo patogênico D), sugerindo que eles foram clones. A prevalência de O157:H7 foi de 1,92% (1/52 animais), demonstrando que os bovinos leiteiros saudáveis de fazendas do Centro-Oeste do Brasil são importantes reservatórios de E. coli O157:H7 altamente patogênicas.